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人ELISA檢測試劑盒試驗操作程序檢驗結果

發布時間:2017-10-23   點擊次數:871次
  人ELISA檢測試劑盒試驗操作程序檢驗結果
  
  人ELISA檢測試劑盒樣本要求
  
  人ELISA檢測試劑盒樣本類型和采集
  
  以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
  
  1、細胞培養上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在-20℃以下,避免反復凍融。
  
  2、血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在-20℃以下,避免反復凍融。
  
  3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復凍融。
  
  人ELISA檢測試劑盒操作程序
  
  1、所有試劑和組分都先恢復到室溫,標準品、質控品和樣品,建議做復孔。
  
  2、按前面試劑準備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
  
  3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
  
  4、設置標準品孔、樣本孔和空白孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。
  
  5、除空白孔外,標準品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。
  
  6、用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  
  7、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
  
  8、如此重復4次(共洗板5次)。若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測的精度。洗板結束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應板。
  
  9、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
  
  10、所有孔加入終止液50μL,在酶標儀上讀取各孔吸光度(OD值)。
  
  
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