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二胺氧化酶(DAO),牛ELISA試劑盒檢測原理

發布時間:2018-03-01   點擊次數:664次

牛二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒

英文名稱:Bovine DAO ELISA Kit
實驗類型:夾心法
檢測范圍:0.75 U/mL – 24 U/mL
zui低檢測限:0.1 U/mL
應用范圍:血清、血漿、組織勻漿、細胞培養物上清或其它相關液體(本產品僅供實驗室科研及非臨床用途)

牛二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒僅供研究使用

 

牛二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒實驗目的

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中牛二胺氧化酶(DAO)的含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

 

 

 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被牛二胺氧化酶(DAO)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛二胺氧化酶(DAO)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

 

 

 

牛二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒組成

試劑盒組成96孔配置48孔配置備注
微孔酶標板8孔×12條8孔×6條 無
標準品0.3mL×6管0.3mL×6管
樣本稀釋液6mL3mL
檢測抗體-HRP10mL5mL
20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋
底物A6mL3mL
底物B6mL3mL
終止液6mL3mL
封板膜2張2張
說明書1份1份
自封袋1個1個

備注:

1. 標準品濃度依次為:24、12、6、3、1.5、0 U/mL

2. 經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

 

 

 

樣本處理及要求

1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

3. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

 

 

 

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

 

 

 

試劑準備

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

 

 

 

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

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