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不得不佩服,11步總結雞elisa檢測試劑盒的稀釋與加樣步驟

發布時間:2018-11-20   點擊次數:1183次
   不得不佩服,11步總結雞elisa檢測試劑盒的稀釋與加樣步驟
  
  
  1.靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
  
  2.特異性:不與其它細胞因子反應。
  
  3.重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
  
  雞elisa檢測試劑盒標本的采集及保存:
  
  1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000xg離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
  
  2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2-8°C1000xg離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
  
  3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000xg離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
  
  注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
  
  雞elisa檢測試劑盒操作步驟:
  
  1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為120U/L,80U/L,40U/L,20U/L,10U/L)。
  
  2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  
  3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  
  4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
  
  5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  
  6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  
  7.溫育:操作同3。
  
  8.洗滌:操作同5。
  
  9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  
  10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  
  11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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